Гибсоны клонжуулалт хэрхэн ажилладаг вэ?
Гибсоны клонжуулалт хэрхэн ажилладаг вэ?

Видео: Гибсоны клонжуулалт хэрхэн ажилладаг вэ?

Видео: Гибсоны клонжуулалт хэрхэн ажилладаг вэ?
Видео: КАК МЕЛ ГИБСОН СТАЛ ИЗГОЕМ [ПОЛНАЯ ХРОНОЛОГИЯ] 2024, Арваннэгдүгээр
Anonim

The Гибсоны клонжуулалт Мастер Микс нь нэг буфер доторх гурван өөр ферментээс бүрдэнэ. Фермент бүр нь урвалын өвөрмөц бөгөөд өвөрмөц үүрэгтэй: T5 Exonuclease - ДНХ-ийн 5' төгсгөлөөс буцаж зажлах замаар нэг хэлхээтэй ДНХ 3'-ийн хэт уналтыг үүсгэдэг. Нэмэлт ДНХ-ийн хэлтэрхийнүүд дараа нь бие биенээ нэгтгэж болно.

Үүнийг харгалзан үзвэл Гибсон хэрхэн ажилладаг вэ?

The Гибсон Assembly® арга нь хязгаарлах ферментийн задрал эсвэл тохирох хязгаарлалтын талбайгүйгээр хоёр ба түүнээс дээш фрагментийг хувилах боломжийг олгодог клончлох процедур юм. Үүний оронд зэргэлдээх хэсгүүдийг саадгүй холбох боломжийг олгохын тулд хэрэглэгчийн тодорхойлсон давхцсан төгсгөлүүдийг фрагментуудад оруулсан болно.

Үүнтэй адилаар Гибсоны Ассемблей Мастер Миксэд юу байдаг вэ? The Gibson Cloning Master Mix нэг буфер доторх гурван өөр ферментээс бүрддэг. Фермент бүр нь урвалын өвөрмөц бөгөөд өвөрмөц үүрэгтэй: T5 Exonuclease - ДНХ-ийн 5' төгсгөлөөс буцаж зажлах замаар нэг хэлхээтэй ДНХ 3'-ийн хэт уналтыг үүсгэдэг. Нэмэлт ДНХ-ийн хэлтэрхийнүүд дараа нь бие биенээ нэгтгэж болно.

Ийм байдлаар Алтан хаалганы угсралт хэрхэн ажилладаг вэ?

Алтан хаалга клончлох эсвэл Алтан хаалганы чуулган болж байна Судлаачдад төрөл IIs хязгаарлалтын фермент ба T4 ДНХ лигаз ашиглан олон ДНХ-ийн хэлтэрхийг нэг хэсэг болгон нэгэн зэрэг, чиглэлтэйгээр нэгтгэх боломжийг олгодог молекул клонжуулах арга. Энэ угсралт юм in vitro хийсэн.

Gateway клонжуулалт хэрхэн ажилладаг вэ?

The GATEWAY Cloning Технологи нь фаг l-ийн ДНХ-ийг E-д нэгтгэхийн тулд ашигладаг талбайн өвөрмөц рекомбинацын системд суурилдаг. Оруулсан фагийн ДНХ-ийг тойрсон attL болон attR хэсгүүд нь тайрах үйл явдлын үед тухайн талбайг тусгайлан нэгтгэж, фаг l дэх attP талбайг шинэчилдэг. E дахь attB сайт.

Зөвлөмж болгож буй: